毒蘑菇与可食用蘑菇的辨别需综合形态特征、生长环境等多方面因素判断，误食毒蘑菇可能导致严重中毒甚至死亡。
毒蘑菇常具有鲜艳颜色或特殊斑纹，如毒鹅膏菌伞面呈亮黄色带白色鳞片。部分毒蘑菇菌柄基部有菌托或菌环结构，如致命白毒伞的杯状菌托。可食用蘑菇如双孢蘑菇通常颜色朴素，菌盖呈白色或浅棕色，表面光滑无特殊附属物。
多数毒蘑菇会散发刺鼻异味，如硫磺味、苦杏仁味或化学药品味。剧毒的鳞柄白毒伞切开后有马铃薯腐烂气味。可食用蘑菇多带清香，如香菇具有特有的木质香气，平菇散发淡淡菌香。
部分毒蘑菇受伤后会分泌乳汁状汁液并变色，如乳菇属物种汁液接触空气后变蓝或变绿。可食用蘑菇如金针菇、杏鲍菇的断面通常保持原色，汁液清澈无明显变色反应。
毒蘑菇多生长在阴暗潮湿、腐殖质丰富的区域，如毒蝇伞常见于松树林落叶层。可食用蘑菇如鸡枞菌多与特定树种共生，牛肝菌类偏好光照充足的林地边缘。但生长位置不能作为唯一判断标准。
通过显微镜观察孢子形态是最可靠方法，如毒鹅膏菌孢子呈椭圆形，可食用蘑菇孢子多为圆形。民间流传的银器变色、大蒜变色等方法均无科学依据。建议采集未知蘑菇时保留完整标本供专业人员鉴定。
预防蘑菇中毒最有效方法是只购买正规渠道的已知可食用品种，野外采摘须由专业人士指导。误食毒蘑菇后应立即催吐并保留样本送医，出现呕吐、腹泻、幻觉等症状需紧急就医。日常饮食中可多选择香菇、平菇等人工培育的安全品种，避免采食生长在污染环境的野生蘑菇。烹饪菌类时要保证彻底加热，部分可食用蘑菇未熟透时仍可能含有毒素。
